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酶聯免疫法
作者:治理員    發布于:2014-09-04 06:28:46    文字:【】【】【
摘要:酶聯免疫法簡稱ELISA

酶聯免疫法簡稱ELISA,是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 聚苯乙烯微量反應板 表面,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法,前者用于檢測大分子抗原,后者用于測定特異抗體。 

自從EngvallPerlman1971)首次報道建立酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays, ELISA)以來,由于ELISA有快速、敏感、簡便、易于標準化等優點,使其得到迅速的發展和廣泛應用 。盡管早期的ELISA由于特異性不夠高而妨礙了其在實際中應用的步伐,但隨著方法的不斷改進、材料的不斷更新,尤其是采用基因工程方法制備包被抗原,采用針對某一抗原表位的單克隆抗體進行阻斷ELISA試驗,都大大提高了ELISA的特異性,加之電腦化程度極高的ELISA檢測儀的使用,使ELISA更為簡便實用和標準化,從而使其成為最廣泛應用的檢測方法之一。

基本原理:

①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。

②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測按時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開,最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化變為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可按照顏色反應的深淺來進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可極大地放大反應效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。

ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑:

①固相的抗原或抗體

②酶標記的抗原或抗體

③酶作用的底物。按照試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件,可設計出各種不同類型的檢測方法。

 
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